在繼續(xù)探討HGC-27細胞,即人未分化胃癌細胞的操作步驟時,我們需細致入微地確保每一步的精確性和無菌操作的重要性。
首先,進行細胞復(fù)蘇時,需快速將凍存的HGC-27細胞從液氮中取出,并迅速置于37℃水浴中輕輕搖晃,確保細胞在1分鐘內(nèi)融化。隨后,將細胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)裝有培養(yǎng)基的離心管中,輕柔混勻后離心,去除上清液,再加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,接種至培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細胞傳代時,待細胞長至80%-90%融合度,棄去舊培養(yǎng)基,用PBS清洗兩次后,加入適量胰酶消化細胞,待細胞變圓、間隙增大時,加入培養(yǎng)基終止消化,吹打制成細胞懸液,按一定比例分至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
此外,細胞凍存也至關(guān)重要。選擇對數(shù)生長期的細胞,按上述方法消化、離心后,用細胞凍存液重懸細胞,調(diào)整細胞密度至適宜范圍,分裝至凍存管中,標(biāo)記好細胞名稱、凍存日期等信息后,按梯度降溫法逐步冷凍,最終置于液氮中長期保存。
在整個操作過程中,嚴(yán)格的無菌操作、精準(zhǔn)的細胞計數(shù)以及適時的培養(yǎng)基更換,都是確保HGC-27細胞健康生長和實驗成功的關(guān)鍵。